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细胞凋亡检测实验原理
  • 发布日期:2024-04-25      浏览次数:103
    • 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。

      凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。

      它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。

      细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。

      在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。

      在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。

       

      在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。

      核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。

      如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder的特征。

       

      相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩说明放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。

      一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。

       

      细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。

      当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着色,凋亡细胞和活细胞不着色。

      而一些活细胞染料由于为亲脂性物质,可跨膜进入活细胞,因而可进行活细胞染色。


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