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胶原酶I型的配置方法
  • 发布日期:2024-05-06      浏览次数:91
    • 胶原酶储存液的配制:
      向每管100mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡盐溶液,含Ca2+、Mg2+),轻轻旋涡震荡使其充分溶解,制备成1g/ml(即1000×)的储存液。
      然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌,分装成小份量,然后于-20℃避光冻存。
      使用前于冰上解冻,避免反复冻融。


      胶原酶工作液的配制:
      根据需要的浓度,将胶原酶I型溶解在适当的溶剂中,如DMEM或PBS。
      对于I型胶原酶,一般使用浓度为0.075%至0.1%。
      如果使用DMEM作为溶剂,可以按照以下步骤操作:
      约5ml DMEM加入胶原酶的玻璃瓶中,吹打使其溶解,移入50ml离心管。
      补DMEM至36ml,再加入4ml FBS,混匀。
      然后分装每10ml一管,于-20度保存。


      如果用于脂肪消化,可以使用以下浓度和步骤:
      计算所需的酶量,例如0.75mg/ml PBS。
      准确称取所需量的胶原酶,加PBS溶解。
      摇匀后,通过滤器过滤,即可使用。
      在37度下消化30-40分钟。

      注意:具体的配置方法可能会根据实验需求和所使用的胶原酶I型产品的说明进行调整。
      在使用前,应仔细阅读产品说明书,并遵循制造商的建议进行操作。


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